Дипломная работа: Методы диагностики и профилактики микробной контаминации при трансплантации эмбрионов

Примечание: (+) наличие роста, (–) отсутствие роста. В контроле без антибиотиков во всех пробах наблюдали рост вышеуказанных культур микроорганизмов.

В последствии нами проведен опыт. Результаты приведены в таблице 2.

Из данных таблицы 2 видно, что из 14 смывов, санированных комплексом антибиотиков гентамицин-ампициллин в концентрациях 12 мкг/мл и 100 Ед/мл, соответственно, 12 – свободных от микроорганизмов, что составляет 85%. В контрольных смывах без добавления антибиотиков только 42,9% смывов стерильны. Различия в росте микроорганизмов на питательных средах из контрольных и опытных смывов достоверны (Р<0,001). Учитывая вышеизложенное, мы считаем целесообразным для санации промывных буферных сред использовать комплекс антибиотиков гентамицин-ампициллин в концентрации 12 мкг/мл и 100 Ед/мл.

Таблица 2. Действие комплекса антибиотиков гентамицин-ампициллин (12 мкг/мл и 100 Ед/мл) на микрофлору промывных сред

Среды для вымывания эмбрионов	Всего исследовано смывов	Отсутствие роста микроорганизмов на питательных средах (МПБ, МПА)
Среды для вымывания эмбрионов	Всего исследовано смывов	Количество	%
Гентамицин + ампициллин (12 мкг/мл и 100 Ед/мл) (опыт)	14	12	85
Без антибиотиков (контроль)	14	6	42,9

Следовательно, из санированных промывных сред матки доноров большая вероятность получить деконтаминированные эмбрионы и предотвратить занос микроорганизмов в матку реципиента.

Полученые нами, промывные маточные среды от коров-доноров оценивали по внешним признакам: цвету, прозрачности. Из 14 проб, в которые антибиотики не добавляли, в 8 случаях (57,1%) отмечали рост микрофлоры на питательных средах и по внешнему виду они были мутными с примесями слизи. Это было основанием предположить, что в промывную маточную среду слизь могла попасть из влагалища или шейки матки, а также из матки при наличии скрытого эндометрита. Добавление антибиотиков в промывные буферные Среды снижали их бактериальную загрязненность и профилактировали эндометриты.

Кроме этого, санированная промывная среда профилактирует возникновение эндометритов при многократном использовании доноров. Микроорганизмы, попадая в микротравмы при извлечении эмбрионов, могут вызвать эндометриты. Об этом свидетельствуют данные В.И. Завирюхи, С.П. Хомина и соавт. (1987). Проведенный ими анализ практической работы показывает, что после проведения нескольких вымываний у коров-доноров развивается гнойной эндометрит.

Наши исследования по санации промывных буферных сред комплексом антибиотиков ампицилин+гентамицин доказывают, что даже при многократном использовании коров-доноров на питательных средах (МПБ и МПА) из проб промывных буферных сред, наблюдается незначительный рост микрофлоры. У отдельных коров-доноров эмбрионы извлекали по 3–4 раза, тем не менее, ни у одного из них эндометрита не наблюдали.

Это свидетельствует о том, что санация промывных буферных сред является средством профилактики заболеваний матки у коров-доноров.

В последние годы многие исследователи стали предлагать отмывку эмбрионов в нескольких стерильных средах, что по их мнению снижает концентрацию вирусов и бактерий в среде до неопасного субинфекционного уровня уже после третьего разбавления (E. Singh et al., 1982; D. Stringfellow et al., 1984). Для дополнительной гарантии полного блокирования случайной инфекции стали добавлять в стерильные среды антибиотики, либо обрабатывать эмбрионы ферментами (трипсином) (E. Singh et al., 1982).

Наши микробиологические исследования показали, что даже многократная отмывка эмбрионов стерильной фосфатно-буферной средой не всегда дает положительный антимикробный эффект. Так, при многократном отмывании эмбрионов стерильными средами до пятой чашки из 25 исследованных нами проб, в 3-х наблюдали рост микрофлоры на питательных средах. Для обеспечения стерильности эмбрионов нами было испытано многократное отмывание их в стерильных буферных средах с добавлением антибиотика гентамицина (12 мкг/мл) в комплексе с ампициллином (100 Ед/мл). Установлено эффективное антимикробное действие этого комплекса антибиотиков (табл. 3). Хотя различия между контролем и опытом не достоверны, существует тенденция к снижению роста микроорганизмов в средах для отмывки эмбрионов, что позволяло получить стерильный пересадочный материал.

С целью определения времени действия антибиотиков на микрофлору использовали в эксперименте модель, которая состояла из среды Дюльбекко, антибактериальных средств и чистых культур микроорганизмов. В качестве антибактериальных средств использовали комбинации антибиотиков в ранее испытанных концентрациях: гентамицин (12 мкг/мл) с ампициллином (100 Ед/мл); пенициллин (100 Ед/мл) со стрептомицином (50 Ед/мл). Действие антибиотиков испытывали на ассоциации чистых культур микроорганизмов, ранее выделенных из половых путей доноров и реципиентов влютеальную фазу полового цикла: Е. coli, Ps. aeruginosa, Вас.subtilis, Staph. aureus). После моделирования через каждые 15 минут производили высевы на питательные среды.

Таблица 3. Сравнительная оценка многократного отмывания эмбрионов средами с добавлением антибиотиков и без них

Среды для отмывки эмбрионов	Всего исследовано сред	Рост микрофлоры на питательных средах (МПБ, МПА)
Среды для отмывки эмбрионов	Всего исследовано сред	Количество	%
Гентамицин + ампициллин (12 мкг/мл и 100 Ед/мл) (опыт)	25	0	0
Без антибиотиков (контроль)	25	3	12±6,49

Опытная модель подвергалась воздействию комплекса антибиотиков гентамицин+ампициллин, контролем служили пробы с антибиотиками пенициллин+стрептомицин и без добавления антибиотиков.

Микробиологические исследования показали, что 15 минутное воздействие комплекса антибиотиков гентамицин+ампициллин убивает ассоциации вышеуказанных микроорганизмов (табл. 4).

Таблица 4. Влияние антибиотиков на микрофлору в промывных буферных средах

Антибиотики, добавленные в среду Дюльбекко

Экспозици (мин.)

Рост микрофлоры на питательных средах

МПБ

МПА

МПА в чашках (кол-во колоний)

Гентамицин + ампициллин

Пенициллин + стрептомицин

Без антибиотиков

Гентамицин + ампициллин

Пенициллин + стрептомицин

Без антибиотиков

Гентамицин + ампициллин

Пенициллин + стрептомицин

Без антибиотиков

Гентамицин + ампициллин

Пенициллин + стрептомицин

Без антибиотиков

100

Примечание: Вышеуказанные антибиотики в концентрациях: гентамицин 12 мкг/мл + ампициллин 100 Ед/мл, пенициллин 100 Ед/мл + стрептомицин 50 Ед/мл. (+) – рост микроорганизмов, (–) – отсутствие роста микроорганизмов

Таблица 5. Влияние антибиотиков на развитие эмбрионов

№ п/п	Среда для культивирования эмбрионов	Стадия развития			Всего эмбрионов, шт.	Стадия развития эмбрионов через 24 часа						Количество развившихся эмбрионов
№ п/п	Среда для культивирования эмбрионов	МП	БР	БП	Всего эмбрионов, шт.	БР	%	БП	%	БЭ	%	Шт.	%
1	Без антибиотиков (контроль)	7	5	7	19	5	71,4	5	100	5	71,4	15	78,95
2	С комплексом антибиотиков: Гентамицин + ампициллин (12 мкг/мл и 10 ЕД/мл)	9	5	7	21	5	55,5	5	100	5	71,4	15	71,43
3	С комплексом антибиотиков: Пенициллин + стрептомицин (100 и 50 ЕД/мл)	6	5	4	15	3	50	2	40	3	75	8	53,33

Существенным качественным параметром развития эмбриона в культуре является образование бластоцеля. В опыте, где была использована среда с добавлением комплекса антибиотиков гентамицин + ампициллин в концентрациях 12 мкг/мл и 100 Ед/мл, в контроле – среда с антибиотиками пенициллин+стептомицин (100 и 50 Ед/мл), во втором контроле – среда без добавления антибиотиков: 5 из 7 (71,4%), 5 из 9 (55,5%) и 3 из 6 (50%) эмбрионов развились из стадии морулы поздней (МП) в бластоцисту раннюю (БР); 5 из 5 (100%), 5 из 5 (100%), 2 из 5 (40%) эмбрионов развились из стадии бластоцисты ранней (БР) в бластоцисту позднюю (БП); 5 из 7 (71,4%), 5 из 7 (71,4%) и 3 из 4 (75%) эмбрионов развились из стадии бластоцисты поздней (БП) в стадию бластоцисты экспандированной (БЭ), соответственно (табл. 5).

Полученные данные свидетельствуют о том, что контакт эмбрионов в течение 2-х часов в среде с комплексом антибиотиков гентамицин + ампициллин в концентрациях 12 мг/мл и 100 Ед/мл, соответственно, не оказывает на их дальнейшее развитие более существенного влияния, чем комплекс антибиотиков пенициллин + стрептомицин в общепринятых концентрациях (100 и 50 Ед/мл). Учитывая большую бактерицидную активность предложенного комплекса антибиотиков по сравнению с комплексом пенициллин + стрептомицин можно считать целесообразным его использование для санации промывных буферных сред и эмбрионов в практике эмбриотрансплантации.

С целью определения влияния комплекса антибиотиков гентамицин + ампициллин (12 мкг/мл и 100 Ед/мл) на приживляемость эмбрионов проведены опыты по пересадке их реципиентам. При подготовке эмбрионов к пересадке мы проводили последовательное отмывание их в пяти чашках буферными средами, содержащими вышеуказанный комплекс антибиотиков. Контролем служили эмбрионы, отмытые средами, не содержащими антибиотиков.

Отмытые опытные и контрольные эмбрионы пересаживали телкам-реципиентам. Стельность определяли по результатам ректальных исследований.

Данные по влиянию антибиотиков на приживляемость эмбрионов приведены в таблице 6.

Таблица 6. Влияние антибиотиков на приживляемость эмбрионов

Среды для отмывки эмбрионов	Всего исследовано реципиентов	Из них стельные
Среды для отмывки эмбрионов	Всего исследовано реципиентов	Количество	%
Гентамицин + ампициллин (12 мкг/мл и 100 Ед/мл) (опыт)	28	21	75
Без антибиотиков (контроль)	32	16	50

Данные таблицы 6 свидетельствуют о том, что из 28 реципиентов, которым были пересажены эмбрионы, отмытые в средах с комплексом антибиотиков гентамицин+ампициллин (12 мкг/мл и 100 Ед/мл), стельными стали 21 голова, что составило 75%, в контроле из 32 реципиентов только 16 голов оказались стельными или 50%.

Таким образом, комплекс антибиотиков гентамицин+ампициллин не только дает хороший антимикробный эффект, но и повышает приживляемость эмбрионов за счет того, что в матку реципиента вместе с пересадочным материалом (эмбрионами) вводилось небольшое количество среды с антибиотиками, которые создавали асептические условия в конкретном участке матки. Поэтому мы рекомендуем всем пунктам трансплантации добавлять указанный комплекс антибиотиков в среды для отмывки эмбрионов.

4.5.2 Экономическая эффективность ветеринарных мероприятий

Экономический ущерб от снижения молочной продуктивности:

У2к =7*13,1*60*0,73=1049,38 грн.

У2оп.=16*13,1*60*0,73=9180,48

Экономический ущерб от недополучения приплода:

У5= Кр (Рв – Рф) * Сп, где

Кр – коэффициент рождаемости

Рв – планировалось отелится

Рф – фактический отел

Сп – стоимость теленка при рождении

У5к = 0,5*(28–21)*263,53=922,3 грн.

У5оп = 0,5* (32–16)*263,53=2108,24 грн.

Уфк = У2 – У5 = 12971,74 грн.

Уф оп = 9180,48+2108,24=11288,72 грн.

Предотвращенный экономический ущерб при трансплантации эмбрионов

Пу = М0 * Кз * Кп * Ц – Уф

М0 – количество восприимчивого поголовья

К3 – коэффициент заболеваемости

Кп - удельная величина потерь основной продукции в расчете на 1 заболевшее животное

Пу (к) = 160*0,375*617,7*0,73–12971,74=14083,52

Пу (оп) = 160*0,375*705,55*0,73–11288,72=19614,37

Зв (к) = 152,3*32=4873,6

Зв (оп) = 157,6*28=4412,8

Эв = Пу – Зв

Эв (к) = 14083,52

Эв (оп) = 19614,37–4412,8=15201,57

Экономический эффект на 1 грн. ветеринарных затрат

Эгрн = Эв / Зв

Эгрн = 9209,92/4873,6=1,89

Эгрн = 15201,57/4412,8=3,44

Вывод: экономическая эффективность ветеринарных мероприятий на 1 гривну ветеринарных затрат составила в контрольной группе 1,89 грн, а в опытной – 3,44 грн, что оправдывает проведение данных мероприятий.

4.6 Обсуждение результатов собственных исследований

Как известно, низкий уровень воспроизводства у самок и длительный интервал времени между поколениями, в среднем 6-7 лет у крупного рогатого скота, ограничивают генетический прогресс в животноводстве. В настоящее время эта проблема решается в значительной степени за счет внедрения новых более радикальных методов разведения животных, в частности метода трансплантации эмбрионов. Значительным недочетом существующей технологии трансплантации является то, что она не предусматривает специальных мероприятий, повышающих приживляемость эмбрионов. Основной задачей нехирургической эмбриотрансплантации является повышение приживляемости эмбрионов, зависящей от многих факторов, одним из которых является асептичность всех проводимых операций.

На приживляемость эмбрионов оказывает влияние много причин. В своей работе мы изучали только влияние микробного фактора на приживляемость эмбрионов. Из литературных данных известно, что в процессе эволюции у животных сложились мощные иммунные барьеры, препятствующие инфицированию половых путей микрофлорой. Основными факторами, обеспечивающими защиту половых путей коров и телок являются барьерные функции слизистых оболочек, особенно шейки матки. Так, цервикальная слизь во время течки и охоты обладает бактерицидным действием (В.П. Полищук, 1984; В.С. Шипилов, 1988). Другие исследователи сообщают, что даже во время течки и половой охоты у многих коров в пробах слизи из шейки матки были обнаружены различные бактерии (M. Krisha et al., 1974).

Наши бактериологические исследования показали, что в промывных буферных средах даже у здоровых животных были обнаружены ассоциации микроорганизмов: E.coli, Staph.aureus, Staph.album, Pseudomonasa., Bac.subtilis.

Зная видовой состав микробов промывных буферных сред, который близок к таковому половых путей реципиентов, нами проведены испытания по санации промывных буферных сред и эмбрионов. Как известно из практики искусственного осеменения, для санации спермы используют различные антибиотики и их комбинации. Применение антибиотиков при эмбриотрансплантации ограничено. Для санации промывных буферных сред А.Д. Бугров и И.М. Величко (1986) использовали гентамицин в комплексе с пенициллинами в концентрации 12 мкг на мл и 100 Ед на мл, соответственно. В своей работе мы испытали три комплекса антибиотиков: гентамицин с ампициллином и гентамицин с пенициллином в концентрациях 4, 6, 10 и 12 мкг / мл и 100 Ед / мл, пенициллин со стрептомицином 100 и 50 Ед/мл, рекомендуемый инструкцией по трансплантации эмбрионов крупного рогатого скота. Лучшими антимикробными свойствами обладали комплексы антибиотиков гентамицин с ампициллином и гентамицин с пенициллином в концентрациях 12 мкг / мл и 100 Ед /мл. Концентрация гентамицина 4, 6 и 10 мкг / мл хотя и подавляла в комплексе с пенициллинами рост синегнойной палочки, но полной бактерицидной активности не наблюдалось. Комбинация пенициллина со стрептомицином оказалась неэффективной против синегнойной палочки и испытуемого штамма кишечной палочки. В контрольной среде, без добавления антибиотиков, наблюдали сплошной рост микроорганизмов.

Поэтому для санации промывных буферных сред лучше использовать комплекс антибиотиков гентамицин с ампициллином или гентамицин с пеницилином (12 мкг / мл и 100 Ед/мл).

Известно, что многие антибиотики, в частности пенициллин со стрептомицином, оказывают токсическое действие на сперму (И.И. Соколовская, 1960; А.П. Волосевич, 1963; С.И. Сердюк и соавт., 1970), ооциты (М.Ф. Карашаев, 1987). Наши исследования показали, что контакт эмбрионов в течение двух часов в среде с комплексом антибиотиков гентамицин с ампициллином (12 мкг/мл и 100 Ед/мл) не оказывает на дальнейшее развитие эмбрионов более существенного влияния, чем комплекс антибиотиков пенициллин со стрептомицином в общепринятых концентрациях (100 и 50 Ед/мл).

Добавление антибиотиков в промывные буферные среды позволило резко снизить их микробную загрязненность. Так, из 14 смывов, санированных комплексом антибиотиков гентамицин с ампициллином (12 мкг / мл и 100 Ед/ мл), 12 – были свободны от микроорганизмов (85%), в тоже время в средах без добавления антибиотиков только 42,9% смывов были стерильны. Аналогичные результаты были получены С.В. Советкиным (1988), который использовал для санации промывных буферных сред ГАМП (гентамицин с ампициллином 50 мкг/мл и 50 Ед/мл).

Наличие или занос микроорганизмов в матку донора может привести к воспалительным процессам, в частности к эндометриту. Добавление антибиотиков в промывные буферные среды является хорошим антимикробным средством, что профилактирует заболевания матки у коров-доноров и позволяет использовать их многократно.

Эмбрионы, извлеченные из промывных буферных сред, в дальнейшем, согласно инструкции, должны проходить еще одну обработку – многократную отмывку в стерильных буферных средах. Наши микробиологические исследования показали, что из 25 проб, отобранных после пятикратного отмывания эмбрионов, в трех пробах наблюдали рост микрофлоры, а при добавлении антибиотиков в среды для отмывки эмбрионов все пробы были стерильными. Аналогичные результаты были получены С.В. Советкиным (1988).

Существенным качественным параметром развития эмбриона в культуре является образование бластоцеля. В опыте, где была использована среда с добавлением комплекса антибиотиков гентамицин + ампициллин в концентрациях 12 мкг/мл и 100 Ед/мл, в контроле – среда с антибиотиками пенициллин + стептомицин (100 и 50 Ед/мл), во втором контроле – среда без добавления антибиотиков: 5 из 7 (71,4%), 5 из 9 (55,5%) и 3 из 6 (50%) эмбрионов развились из стадии морулы поздней (МП) в бластоцисту раннюю (БР); 5 из 5 (100%), 5 из 5 (100%), 2 из 5 (40%) эмбрионов развились из стадии бластоцисты ранней (БР) в бластоцисту позднюю (БП); 5 из 7 (71,4%), 5 из 7 (71,4%) и 3 из 4 (75%) эмбрионов развились из стадии бластоцисты поздней (БП) в стадию бластоцисты экспандированной (БЭ), соответственно. Различия между опытом и контролем не достоверны (Р>0,05).

Санация промывных буферных сред и отмывка эмбрионов средами с антибиотиками положительно влияли на приживляемость эмбрионов. Из 28 реципиентов, которым были пересажены эмбрионы, отмытые средами с антибиотиками, 21 телка (75%) стала стельной, в контроле без добавления антибиотиков приживляемость составила 50%.

Мы считаем, что это происходило благодаря тому, что в матку реципиента вместе с пересаженным материалом (эмбрионами) вводили небольшое количество среды Дюльбекко с антибиотиками, которые создавали асептические условия в конкретном участке матки.

В технологию по извлечению и пересадке эмбрионов для профилактики микробной контаминации нами были введены элементы, позволяющие повысить приживляемость эмбрионов, включающие:

1. санацию половых путей коров-доноров и телок-реципиентов с экспозицией 15 минут перед эмбриотрансплантацией;

2. санацию промывных буферных сред комплексом антибиотиков гентамицин с ампициллином в концентрации 12 мкг / мл и 100 Ед / мл;

3. отмывку эмбрионов в среде Дюльбекко с добавлением комплекса антибиотиков гентамицин с ампициллином (12 мкг / мл и 100 Ед/мл).

5. Охрана труда

5.1 Организация охраны труда

В соответствии с «Законом Украины об охране труда» от 14 октября 1992 года, утвержденного Верховным Советом Украины, руководители хозяйств обязаны разработать совместно с профсоюзным комитетом план мероприятий по охране труда и обеспечивать их выполнение.

В ХБТЦ за охрану труда несет ответственность директор и заведующие отделами, на которых возложена координация деятельности всех работников центра и организация контроля работы по созданию здоровых и безопасных условий труда (ДНАОП 0.00.4.21–93 Типове положення про службу охорони праці (Зміни від 17.05.96 №82)).

4 апреля 1994 года приказом государственного комитета Украины по надзору и охране труда утверждено «Типовое положение об обучении, инструктаж и проверке знаний работников по вопросам охраны труда». В хозяйстве проводится вводный инструктаж, первичный инструктаж на рабочем месте, повторный инструктаж, внеплановый и целевой. Все виды инструктажей проводятся применительно к профессиям в соответствии с действующими инструкциями, правилами и нормами по технике безопасности, руководствуясь перечнем вопросов, имеющихся в «Типовом положении» (ДНАОП 0.00.4.12–99 Типове положення про навчання працівників з питань охорони праці).

Фактические затраты на охрану труда в 1999–2001 годах выше планируемых. В связи с тем, что в хозяйстве имеют случаи травматизма, ежегодно проводится анализ несчастных случаев путём определения коэффициента частоты травматизма и заболеваний.

Финансирование мероприятий по охране труда происходит за счет собственных средств.

5.2 Производственная санитария

Помещения ХБТЦ построено согласно СНиПа II 97–76. Генеральные планы сельскохозяйственных предприятий и СНиПа 2.09.04.-87. Административные и бытовые здания. Микроклимат лаборатории соответствует ГОСТ 12.1.005–88 Воздух рабочей зоны. Общие санитарно-гигиенические требования. СНиП 2.04.04–86. Отопление, вентиляция и кондиционирование воздуха. Нормы проектирования. СНиП II‑4–79. Освещение. Нормы проектирования.

5.3 Пожарная безопасность

В ХБТЦ имеется пожарный щит с огнетушителями, вёдрами, простыми и основными лопатами, а также стоит бочка с водой и ящики с песком.

При возникновении пожаров в период уборки заготовки кормов и в местах их хранения вызывают пожарную помощь и присутствуют в ликвидации его имеющимися средствами.

Обеспечение пожарной безопасности предприятий и организаций возлагается на их руководителей и уполномоченных ими лица, если иное не предусмотрено соответствующим договором.

Система организационных мероприятий включает:

– Организацию пожарной охраны, разработку норм и правил пожарной безопасности (СНиП 2.01.02–85. Противопожарные нормы проектирования зданий и сооружений ГОСТ 12.1.004–91 Пожарная безопасность. Общие требования), а так же инструктаж о порядке работы с пожароопасными веществами и материалами, соблюдения противопожарного режима и о действии людей при возникновении пожара.

Выводы и предложения

1. Улучшить финансирование охраны труда по инструктажу.

2. Четкий контроль за соблюдением охраны труда.

3. Привлечение к строгой ответственности за нарушение охраны труда, в плоть до увольнения с занимаемой должности (Законодавство України про Охорону праці. Збірник нормативних документів. В 4‑х томах. – К., 1997)

6. Выводы

1. Бактериальная контаминация половых путей телок-реципиентов снижается в фолликулярную фазу и возрастает в лютеальную фазу полового цикла в момент пересадки эмбрионов.

2. Микрофлора половых путей (Stahp.aureus и E.coli) оказывает отрицательное влияние на приживляемость эмбрионов при трансплантации их телкам-реципиентам.

3. Добавление в промывные буферные среды комплекса антибиотиков гентамицин 12 мкг/мл с ампициллином 100 Ед/мл снижает микробную контаминацию эмбрионов, профилактирует занос инфекции в матку реципиента, а также заболевания коров-доноров эндометритами.

4. Многократная отмывка эмбрионов средой Дюльбекко с добавлением комплекса антибиотиков гентамицин с ампициллином в концентрации 12 мкг/мл и 100 Ед/мл, соответственно, обеспечивает полную деконтаминацию эмбрионов и повышает их приживляемость на 25%.

Предложения производству

1. Комплекс антибиотиков гентамицин в концентрации 12 мкг/ мл с ампициллином 100 Ед/мл рекомендуется добавлять в промывные буферные среды и в среды для отмывки эмбрионов.

2. Бактериологический контроль смывов из матки рекомендуется проводить раз в год у каждого донора для определения бактериальной загрязненности при вымывании эмбрионов на пунктах трансплантации.

Список литературы

1. Балашов Н.Г. Определение безвредности, эффективности и порядок испытания препаратов для разбавления и санации спермы. // Справочник. Ветеринарные препараты. – М. – 1981. – с. 419 – 427, 435 – 438.

2. Беликов А.А. Институт животноводства УААН: Микробная контаминация спермы хряков: Повышение эффективности ведения свиноводства. – Быково, 1999, – С. 200–203 – 1999

3. Биргер И.О. Методика определения антагонизма микробов // Справочник по микробиологическим и вирусологическим методам исследования. – М. – «Медицина». – 1973. - с. 121–125.

4. Бугров А.Д., Величко И.М., Теличка Т.А. Влияние антибиотиков на жизнеспособность эмбрионов. // Тезисы докладов II Республиканской научно-производственной конференции. – Львов. – 1988. – с. 11–12.

5. Бугров А.Д., Величко И.М. Микробная контаминация при трансплантации эмбрионов. // Тезисы докладов симпозиума по трансплантации эмбрионов крупного рогатого скота. – Тарту. -1986. – с. 38.

6. Голубева Е.Д. Применение пенициллина и стрептомицина при бактериальной загрязненности спермы и влияния их на переживаемость спермиев // Плем. работа и повышение продуктивности в животноводстве. Минск. – 1965. – с. 49–53.

7. Жильцов Н.З., Мадисон В.В. Трансплантация эмбрионов в молочном скотоводстве // Животноводство. – 1986. – №6. – с. 64.

8. Завертяев Б.П. // Значение многоплодия в скотоводстве. – М.: «Россельиздат». – 1987. – с. 6–15.

9. Завертяев Б.П. // Биотехнология в воспроизводстве и селекции крупного рогатого скота. – Л.: «Агропромиздат». - 1989.

10. Завирюха В.И., Хомин С.П., Шаловило С.Г., Гамота А.А. Профилактика субклинических эндометритов у коров-доноров. // Тезисы докладов республиканской научно-практической конференции. – Львов. -1987. – с. 28.

11. Зацепилова Т.А., Кудрин А.Н. Влияние лекарственных веществ на оплодотворенную яйцеклетку и эмбрион // Фармация. – 1983. – №4. – с. 48.

12. Зверева Г.В., Хомин С.П., Завирюха В.И., Шаловило С.Г., Гамота А.А. Ветеринарные аспекты трансплантации эмбрионов у крупного рогатого скота // Тезисы докладов республиканской научно-практической конференции. – Львов. – 1987. – с. 30–31.

13. Инструкция по трансплантации эмбрионов крупного рогатого скота. – М. – Госагропром СССР. – 1987.

14. Качмар О.М.; Авдосьева I.К.; Урус Р.В. Виявлення мiкоплазм в спермi бугаiв-плiдникiв: Информ.бюл. / Укр.акад. аграр. наук. Ин‑т эксперим. клинич. вет. медицины, 1994, – С. 250–1994

15. Квасницкий А.В. Опыт межпородной пересадки яйцеклеток. // Советская зоотехния. – 1951. – №19. – с. 50–52.

16. Квасницкий А.В., Мартыненко Н.А., Близнюченко А.Г. // Трансплантация эмбрионов и генная инженерия в животноводстве. – Киев.: Урожай. -1988.

17. Клинский Ю., Сергеев Н., Шихов И. Теленок из замораживанного эмбриона // Животноводство. – 1980. – №7. – с. 35

18. Ковалев В.Ф., Волков И.Б., Виолин Б.В. и соавт. Антибиотики, сульфаниламиды и нитрофураны // Справочник. – М. ВО «Агропромиздат». – 1988. – с. 40–41.

19. Козловский Е.В., Емельяненко П.А. Микрофлора тела с.‑х. животных. // Ветеринарная микробиология. – М.: – «Колос». -1982. – с. 53–56.

20. Корниенко П.Ф., Трефилов А.А., Шохор З.И., Белоглазов П.Г. // Справочник по аппаратуре, приборам, инструментам и лабораторному оборудованию. – Киев.: «Урожай». – 1987.

21. Кондратов Б.Д. Псевдомонойрсительство у быков-производителей // Молочное и мясное скотоводство. – 1976. – №2. – с. 29.

22. Косарев С.Р. Влияние бактерицидных веществ на выживаемость спермиев хряков. // Сб. науч. трудов Всесоюзного государственного научно-контрольного института ветеринарных препаратов. – М. – 1984. – с. 221–240.

23. Косарев С.Р. Действие антибиотиков и золотистого стафилококка на спермиев хряков: Актуал. пробл. ветеринарии. – Барнаул, 1995, – С. 184-1995

24. Кузнецова С.М. Комбинированная антибиотикотерапия бактериальных инфекций // Антибиотики. – 1983. – 28. – 12. - с. 19–37.

25. Кудрявцев И.В., Голубев А.К. Перспективы использования методов биотехнологии в животноводстве // Успехи современной генетики./ М.: «Наука». – 1985. – №13. – с. 21.

26. Лакин Г.Ф. Статистические характеристики при альтернативной группировке вариант. // Биометрия. – М.: «Высшая школа». – 1990. – с. 64–65.

27. Логвинов Д.Д. Асептическое взятие спермы у быков. // Ветеринария. – 1972. – №5. – с. 86–89.

28. Логвинов Д.Д. Профилактика микробного и грибкового загрязнения спермы быков // Труды Харьковского зооветинститута. – 1970. – 5 (29) – с. 167–172.

29. Логвинов Д.Д., Плугарев В.П., Хатура Г.Г., Миллер А.Г. Санитарная оценка методов ведения спермы быков коровам и телкам. // Тезисы докладов республиканской научной конференции. – Харьков. – 1988. – с. 25–26.

30. Мартыненко Н.А. // Эмбриональная смертность с-х. животных и ее предупреждение. – Киев.: Урожай. – 1971. – с. 16–17, 238–256.

31. Мадисон В.В., Мадисон В.Л. Ветеринарный контроль при пересадках эмбрионов и борьба с инфекционными болезнями. // Трансплантация эмбрионов в практике разведения молочного скота. – М.: «Агропромиздат». – 1988. – с. 18–25.

32. Мадисон В.Л., Мадисон В.В. Трансплантация эмбрионов крупного рогатого скота // Животноводство. – 1985. – П. – с. 60–61.

33. Михайлов Н.Н. Значение инфекционных факторов в этиологии бесплодия с-х. животных. // Воспроизводство и профилактика бесплодия с-х. животных. – М. – 1976. – с. 65-74.

34. Мозгов И.Е. Антибиотики // Фармакология. – М.: «Колос». – 1974. – с. 383–410.

35. Муромцев Г.С., Бутенко Р.Г., Тихоненко Т.И., Прокофьев М.И. Трансплантация эмбрионов и клеточная инженерия в животноводстве // Основы сельскохозяйственной биологии. – М – .1990. – с. – 236–300.

36. Мюйрсепп И.Я., Яакма Ю.Р. Влияние состояния эндометрия коров-доноров эмбрионов на количество, качество и приживляемость эмбрионов // Тезисы докладов научно-практической конференции. – Львов. – 1988. – с. 21.

37. Нежданов А.Г., Черемисинов Г.А., Ковальчук А.А. Значение йода и сроков осеменения в профилактике бесплодия с-х. животных. – М.: «Колос». – 1976. – с. 106.

38. Новохатский А.С., Герасимова С.С. Исследования противовирусного действия гентамицина // Антибиотики. – 1975. – т. 20. – №5. – с. 428–433.

39. Осидзе Д.Ф. Стимулирующие и лечебные препараты, кормовые добавки // Справочник ветеринарные препараты. – М.: «Колос». – 1981. – с. 350–414.

40. Осташко Ф.И., Величко И.М., Иванов B.C. Микробный фактор, как одна из причин изменяемости результатов искусственного осеменения крупного рогатого скота // Физиология воспроизведения сельскохозяйственных животных /Советско-американский семинар. - Харьков. – 1977. – с. 257–261.

41. Осташко Ф.И. Насущие вопросы искусственного осеменения крупного рогатого скота // Тезисы докладов научно-практической конференции по теории и практике воспроизводства с-х. животных. – Харьков. – 1972 – с. 16–18.

МЕНЮ

Дипломная работа: Методы диагностики и профилактики микробной контаминации при трансплантации эмбрионов

4.5.2 Экономическая эффективность ветеринарных мероприятий

4.6 Обсуждение результатов собственных исследований

5.1 Организация охраны труда

5.2 Производственная санитария

5.3 Пожарная безопасность

Выводы и предложения

ИНТЕРЕСНОЕ