| |||||
МЕНЮ
| Курсовая работа: Свойства кисломолочных напитков при хранении3.3. Определение сальмонелл Определение сальмонелл возможно проводить либо на среде BiMedia 201B, либо на среде BiMedia 205A. 3.3.1. Определение сальмонелл на среде BiMedia 201B. 1. Среда: BiMedia 201B (Rappaport-Vassiliadis) (готовится в соответствии с инструкцией - см. гл. 10). 2. Предварительное обогащение. Смешать необходимое количество продукта, в котором регламентируется отсутствие сальмонелл, со стерильной 1%-ной пептонной водой или средой Pre-Media 205А в соотношении 1:10. Тщательно перемешать. Инкубировать в течение 14 - 16 ч при 37 -С. Период предварительной инкубации для мясных, рыбных и молочных продуктов составляет 7 - 8 ч при 37 -С. 3. Протокол измерения. 3.1. Установить температуру 37 -С на приборе "Bac Trac". 3.2. В основном меню программы "Bac Trac" установить следующие параметры: Параметры для инкубаторного блока (Adjust parameters): Время исследования (Duration) 24 ч Масштаб измерений (Scale): М-параметр 0 - 80% Е-параметр 0 - 80% Время задержки (Delay) 1 ч Пороговые значения (Thresholds): М-параметр 5% Е-параметр 15%. Проводить учет результатов по Е-параметру. Пороговое значение по времени (Time limit) 12 ч 30 мин. 4. Добавить в каждую измерительную ячейку по 10 мл среды BiMedia 201B. 5. Внести 0,1 мл предобогащенного образца в ячейку; тщательно перемешать содержимое, вращая ячейку между ладонями (не переворачивать ячейку!). 6. Для контроля среды используйте одну измерительную ячейку с 10 мл среды BiMedia 201B (без инокулята). 7. Выбрать в основном меню программы ЗАПУСК ИЗМЕРЕНИЙ (Start Measurement) и начать измерения. 8. После того как каждая позиция в блоке будет отмаркирована как свободная на экране монитора, поместить измерительные ячейки в прибор "Bac Trac". Измерение начнется автоматически через 1 ч после загрузки ячеек в прибор. Рост микроорганизмов и время определения изменения импеданса (IDT) будут записаны автоматически. УЧЕТ РЕЗУЛЬТАТОВ: Образец загрязнен сальмонеллами, если изменение импеданса по Е-параметру превышает 15%-ное пороговое значение в течение 12 ч 30 мин. 9. Подтверждение Salmonella-позитивных образцов. В случае положительного ответа на сальмонеллы проводитсяподтверждение с высевом на селективные питательные среды в соответствии с нормативными документами. Высев производится непосредственно из измерительной ячейки. 3.3.2. Определение сальмонелл на среде BiMedia 205A. 1. Среда BiMedia 205A (Selenite-Cystine media) (готовится в соответствии с инструкцией - см. гл. 10). 2. Предварительное обогащение. Смешать необходимое количество продукта, в котором регламентируется отсутствие сальмонелл, со стерильной 1%-ной пептонной водой или средой Pre-Media 205A в соотношении 1:10. Тщательно перемешать. Инкубировать в течение 16 - 18 ч при 37 -С. 3. Протокол измерения. 3.1. Установить температуру 37 -С на приборе "Bac Trac". 3.2. В основном меню программы "Bac Trac" установить следующие параметры: Параметры для инкубаторного блока (Adjust parameters): Время исследования (Duration) 24 ч Масштаб измерений (Scale): М-параметр 0 - 30% Е-параметр 0 - 30% Время задержки (Delay) 1 ч Пороговые значения (Thresholds): Е-параметр 10% М-параметр 5%. Проводить учет результатов по Е-параметру. Time limit (пороговое значение по времени) 23 ч. 4. Добавить в каждую измерительную ячейку по 10 мл среды BiMedia 205A. 5. Добавить 0,1 мл предобогащенного образца в ячейку; тщательно перемешать содержимое, вращая ячейку между ладонями (не переворачивать ячейку!). 6. Для контроля среды используйте одну измерительную ячейку с 10 мл среды BiMedia 205A (без инокулята). 7. Выбрать в основном меню программы ЗАПУСК ИЗМЕРЕНИЙ (Start Measurement) и начать измерения. 8. После того как каждая позиция в блоке будет отмаркирована как свободная на экране монитора, поместить измерительные ячейки в прибор "Bac Trac". Измерение начнется автоматически через 1 ч после загрузки ячеек в прибор. Рост микроорганизмов и время определения изменения импеданса (IDT) будут записаны автоматически. УЧЕТ РЕЗУЛЬТАТОВ: Образец загрязнен сальмонеллами, если изменение импеданса превышает 10%-ное пороговое значение по Е-параметру и 5%-ное пороговое значение по М-параметру в течение 23 ч. 9. Подтверждение Salmonella-позитивных образцов. В случае положительного ответа на сальмонеллы проводится подтверждение с высевом на селективные питательные среды в соответствии с нормативными документами. Высев производится непосредственно из измерительной ячейки. 3.4. Определение энтерококков 1. Среда BiMedia 301А (готовится в соответствии с инструкцией -см. гл. 10). 2. Протокол измерения. 2.1. Установить температуру 37 -С на приборе "Bac Trac". 2.2. В основном меню программы "Bac Trac" установить следующие параметры: Параметры для инкубаторного блока (Adjust parameters): Время исследования (Duration) 24 ч Масштаб измерений (Scale): М-параметр 0 - 50% Е-параметр 0 - 50% Время задержки (Delay) 1 ч Пороговые значения (Thresholds): М-параметр 5% Е-параметр 10%. Проводить учет результатов по М-параметру. Пороговое значение по времени (Time limit) 23 ч. 3. Добавить в каждую измерительную ячейку по 9 мл среды BiMedia 301А. 4. Добавить исследуемый образец из соответствующего разведения продукта, в котором не допускается наличие энтерококков. 5. Тщательно перемещать содержимое, вращая ячейку между ладонями (не переворачивать ячейку!). 6. Для контроля среды используйте одну измерительную ячейку с 10 мл среды BiMedia 301А (без инокулята). 7. Выбрать в основном меню программы ЗАПУСК ИЗМЕРЕНИЙ (Start Measurement) и начать измерения. 8. После того как каждая позиция в блоке будет отмаркирована как свободная на экране монитора, поместить измерительные ячейки в прибор "Bac Trac". Измерение начнется автоматически через 1 ч после загрузки ячеек в прибор. Рост микроорганизмов и время определения изменения импеданса (IDT) будут записаны автоматически. УЧЕТ РЕЗУЛЬТАТОВ: Образец загрязнен энтерококками, если изменение импеданса превышает 5%-ное пороговое значение по М-параметру и 10%-ное пороговое значение по Е-параметру в течение 23 ч. 3.5. Определение Staphylococcus aureus 1. Среда BiMedia (Pre-Media 350A и BiMedia 350A) (готовится в соответствии с инструкцией - см. гл. 10). 2. Приготовление образца. Смешать 10 г продукта со стерильной водой в соотношении 1:10, затем тщательно гомогенизировать образец. 3. Предварительное обогащение. Добавить необходимое количество суспензии продукта, в котором регламентируется отсутствие Staphylococcus aureus (например, 10 мл суспензии, если Staphylococcus aureus определяется в 1 г продукта, и 1 мл суспензии, если Staphylococcus aureus определяется в 0,1 г продукта, к 90 мл или 9 мл среды Pre-Media 350А соответственно). Инкубировать образец 24 ч. 4. Протокол измерения. 4.1. Установить температуру 37 -С на приборе "Bac Trac". 4.2. В основном меню программы "Bac Trac" установить следующие параметры: Параметры для инкубаторного блока (Adjust parameters): Время исследования (Duration) 24 ч Масштаб измерений (Scale): М-параметр 0 - 30% Е-параметр 0 - 30% Время задержки (Delay) 1 ч Пороговые значения (Thresholds): Е-параметр 10% М-параметр 5%. Проводить учет результатов по Е-параметру. Пороговое значение по времени (Time limit) 23 ч. 5. Добавить в каждую измерительную ячейку по 10 мл среды BiMedia 350A. 6. Добавить 0,1 мл предобогащенного образца в ячейку; тщательно перемешать содержимое, вращая ячейку между ладонями (не переворачивать ячейку!). 7. Для контроля среды используйте одну измерительную ячейку с 10 мл среды BiMedia 350A (без инокулята). 8. Выбрать в основном меню программы ЗАПУСК ИЗМЕРЕНИЙ (Start Measurement) и начать измерения. 9. После того как каждая позиция в блоке будет отмаркирована как свободная на экране монитора, поместить измерительные ячейки в прибор "Bac Trac". Примечание. Время между внесением предобогащенных образцов в ячейки и загрузкой измерительных ячеек в инкубаторный блок не должно превышать 15 мин. В случае превышения данного интервала времени могут быть получены ложные результаты! Измерение начнется автоматически через 1 ч после загрузки ячеек в прибор. Рост микроорганизмов и время определения изменения импеданса (IDT) будут записаны автоматически. УЧЕТ РЕЗУЛЬТАТОВ: Образец загрязнен Staphylococcus aureus, если изменение импеданса превышает 10%-ное пороговое значение по Е-параметру в течение 23 ч. 10. Подтверждение Staphylococcus aureus - позитивных образцов. В случае положительного ответа на Staphylococcus aureus проводится подтверждение в соответствии с нормативными документами (постановка коагулазного, каталазного тестов и теста гемагглютинации). Материал берется непосредственно из измерительной ячейки. 3.6. Определение листерий 1. Среда Pre-Media 403А и BiMedia 403А (готовится в соответствии с инструкцией - см. гл. 10). 2. Предварительное обогащение. Для предварительного обогащения используется среда Pre-Media 403А. Смешать необходимое количество продукта, в котором регламентируется отсутствие листерий, со средой Pre-Media 403А в соотношении 1:10, затем гомогенизировать образец. Инкубировать образец со средой Pre-Media 403А в течение 24 ч. 3. Протокол измерения. 3.1. Дать среде BiMedia 403А уравновеситься при комнатной температуре в течение 12 ч. 3.2. Установить температуру 37 -С на приборе "Bac Trac". 3.3. В основном меню программы "Bac Trac" установить следующие параметры: Параметры для инкубаторного блока (Adjust parameters): Время исследования (Duration) 36 ч Масштаб измерений (Scale): М-параметр 0 - 20% Е-параметр 0 - 80% Время задержки (Delay) 1 ч Пороговые значения (Thresholds): М-параметр 5% Е-параметр 15%. Проводить учет результатов по Е-параметру. Пороговое значение по времени (Time limit) 30 ч. 4. Добавить в каждую измерительную ячейку по 10 мл среды BiMedia 403А. 5. Добавить в ячейку 0,1 мл предобогащенного образца; тщательно перемешать содержимое, вращая ячейку между ладонями (не переворачивать ячейку!). 6. Для контроля среды используйте одну измерительную ячейку с 10 мл среды BiMedia 403А (без инокулята). 7. Выбрать в основном меню программы ЗАПУСК ИЗМЕРЕНИЙ (Start Measurement) и начать измерения. 8. После того как каждая позиция в блоке будет отмаркирована как свободная на экране монитора, поместить измерительные ячейки в прибор "Bac Trac". Измерение начнется автоматически через 1 ч после загрузки ячеек в прибор. Рост микроорганизмов и время определения изменения импеданса (IDT) будут записаны автоматически. УЧЕТ РЕЗУЛЬТАТОВ: Образец загрязнен листериями, если изменение импеданса превышает 15%-ное пороговое значение по Е-параметру в течение 30 ч. 9. Подтверждение Listeria-позитивных образцов. В случае положительного ответа на листерии проводится подтверждение с высевом на селективные питательные среды в соответствии с нормативными документами. Высев производится непосредственно из измерительной ячейки. 3.7. Определение дрожжей и плесеней Определение дрожжей и плесеней основано на использовании непрямого метода определения изменения импеданса среды. Сущность непрямого метода заключается в следующем: СО, образующийся в процессе роста дрожжей (плесеней), поглощается раствором щелочи, изменяя проводимость среды. Изменение проводимости раствора щелочи регистрируется на приборе "Bac Trac". Для данного метода используются ячейки двух типов: 1) измерительные неавтоклавируемые 10 мл КОН-ячейки (стойкие к воздействию щелочи); 2) автоклавируемые 2 мл криопробирки для исследуемых образцов. 1. Среда BiMedia 501B (готовится в соответствии с инструкцией - см. гл. 10). 1.1. Для исследования дрожжей рекомендуется использовать среду BiMedia 501B. 1.2. Приготовить 0,2%-ный раствор КОН (2 г твердого КОН растворите в 1 л дистиллированной воды). Раствор КОН должен храниться в холодильнике тщательно закрытым. Срок хранения раствора КОН - 1 неделя. 2. Протокол измерения. 2.1. Установить температуру 30 -С на приборе "Bac Trac". 2.2. В основном меню программы "Bac Trac" установить следующие параметры: Параметры для инкубаторного блока (Adjust parameters): Время исследования (Duration) 24 ч Масштаб измерений (Scale): М-параметр (-90 - 10)% Е-параметр (-90 - 10)% Время задержки (Delay) 1 ч. Пороговые значения (Thresholds): выбирается соответствующий калибровочный файл для исследования дрожжей (плесеней) и параметры пороговых значений вносятся автоматически либо проводить учет по М- параметру (-20%). Установить значение параметра Drop Stop No. 3. В измерительную КОН-ячейку внести 1 мл 0,2%-ного раствора КОН. 4. Внести 1 мл среды BiMedia 501B в стерильную криопробирку. 5. Внести 1 мл предварительно подготовленного в соответствии с требованиями нормативной документации исследуемого образца продукта в криопробирку с 1 мл среды. 6. При закрытии криопробирки необходимо оставить приблизительно 1 мм на резьбе между флаконом и крышкой с тем, чтобы была возможность выхода СО при его образовании и повышении 2 давления в пробирке. Не открывать крышку криопробирки более, чем рекомендовано, так как это может блокировать работу клапанной системы ячейки. Избегайте прикосновения наконечником пипетки к резьбе криопробирки во время ее заполнения. Жидкость может препятствовать выходу газа из ячейки и вызывать ошибочные сигналы. 7. Для контроля использовать одну криопробирку с 2 мл среды (без инокулята). 8. Поместить криопробирку в КОН-ячейку между 4-мя электродами. 9. Тщательно закрыть КОН-ячейку. 10. Выбрать в основном меню программы ЗАПУСК ИЗМЕРЕНИЙ (Start Measurement) и начать измерения. 11. После того как каждая позиция в блоке будет отмаркирована как свободная на экране монитора, поместить измерительные ячейки в прибор "Вас Trac". Измерение начнется автоматически через 1 ч после загрузки ячеек в прибор. Рост микроорганизмов и время определения изменения импеданса (IDT) будут записаны автоматически. При пересечении порогового значения происходит автоматический подсчет численности дрожжей (плесеней) в исследуемом образце. УЧЕТ РЕЗУЛЬТАТОВ: Результат определения численности дрожжей (плесеней) КОЕ (CFU) выдается автоматически в виде количества микроорганизмов в 1 мл исследуемого продукта. Если исследуется твердый продукт, то результат определения КОЕ (CFU) необходимо умножить на степень разведения (х 10) для получения КОЕ в 1 г продукта. 3.8. Определение лактобацилл 1. Среда BiMedia 620A (готовится в соответствии с инструкцией -см. гл. 10). 2. Протокол измерения. 2.1. Установить температуру 37 -С на приборе "Bac Trac". 2.2. В основном меню программы "Bac Trac" установить следующие параметры: Параметры для инкубаторного блока (Adjust parameters): Время исследования (Duration) 24 ч Масштаб измерений (Scale): М-параметр 0 - 50% Е-параметр 0 - 50% Время задержки (Delay) 1 ч Пороговые значения (Thresholds): М-параметр 5% Е-параметр 10%. Проводить учет результатов по М- и Е-параметрам. Пороговое значение по времени (Time limit) 23 ч. 3. Добавить в каждую измерительную ячейку по 9 мл среды BiMedia 620A. 4. Добавить исследуемый образец из соответствующего разведения продукта, в котором не допускается наличие лактобацилл. 5. Тщательно перемешать содержимое, вращая ячейку между ладонями (не переворачивать ячейку!). 6. Для контроля среды используйте одну измерительную ячейку с 10 мл среды BiMedia 620A (без инокулята). 7. Выбрать в основном меню программы ЗАПУСК ИЗМЕРЕНИЙ (Start Measurement) и начать измерения. 8. После того как каждая позиция в блоке будет отмаркирована как свободная на экране монитора, поместить измерительные ячейки в прибор "Bac Trac". Измерение начнется автоматически через 1 ч после загрузки ячеек в прибор. Рост микроорганизмов и время определения изменения импеданса (IDT) будут записаны автоматически. УЧЕТ РЕЗУЛЬТАТОВ: Образец загрязнен лактобациллами, если изменение импеданса превышает 5%-ное пороговое значение по М-параметру и 10%-ное пороговое значение по Е-параметру в течение 23 ч. 3.9. Определение сульфитредуцирующих клостридий 1. Среда BiMedia 660A (готовится в соответствии с инструкцией - см. гл. 10). 2. Протокол измерения. 2.1. Установить температуру 43 - С на приборе "Bac Trac". 2.2. В основном меню программы "Bac Trac" установить следующие параметры: Параметры для инкубаторного блока (Adjust parameters): Время исследования (Duration) 24 ч Масштаб измерений (Scale): М-параметр 0 - 50% Е-параметр 0 - 50% Время задержки (Delay) 1 ч Пороговые значения (Thresholds): М-параметр 5% Е-параметр 10%. Проводить учет результатов по М-параметру. Пороговое значение по времени (Time limit) 23 ч. Определение сульфитредуцирующих клостридий необходимо проводить, используя измерительные ячейки для анаэробов (измерительные ячейки с серыми крышками). Определение сульфитредуцирующих клостридий возможно также проводить, используя обычные измерительные ячейки (см. примечание). 3. Добавить в каждую измерительную ячейку по 9 мл среды BiMedia 660A и автоклавировать ячейки с внесенной в них питательной средой (крышки должны быть приоткрыты!). 4. Приготовить соответствующие разведения продукта, в котором не допускается наличия сульфитредуцирующих бактерий. 5. Внести 1 мл исследуемого образца в измерительные ячейки сразу после автоклавирования, не дожидаясь снижения температуры (приблизительно 85 -С). 6. Закрыть измерительные ячейки крышками. 7. Тщательно перемешать содержимое, вращая ячейку между ладонями (не переворачивать ячейку!). 8. Для контроля среды используйте одну измерительную ячейку с 10 мл среды BiMedia 660A (без инокулята). 9. Выбрать в основном меню программы ЗАПУСК ИЗМЕРЕНИЙ (Start Measurement) и начать измерения. 10. После того как каждая позиция в блоке будет отмаркирована как свободная на экране монитора, поместить измерительные ячейки в прибор "Bac Trac". Измерение начнется автоматически через 1 ч после загрузки ячеек в прибор. Рост микроорганизмов и время определения изменения импеданса (IDT) будут записаны автоматически. УЧЕТ РЕЗУЛЬТАТОВ: Образец загрязнен сульфитредуцирующими клостридиями, если изменение импеданса превышает 5%-ное пороговое значение по М- параметру и 10%-ное пороговое значение по Е-параметру в течение 23 ч. На стенках измерительной ячейки должен обнаруживаться выпавший осадок черного цвета. Примечание. Определение сульфитредуцирующих клостридий возможно также проводить, используя обычные измерительные ячейки и парафиновое масло. Для этого необходимо добавить в каждую измерительную ячейку по 8 мл среды BiMedia 660A и 1 мл парафинового масла (как покрывающий слой) и автоклавировать ячейки с внесенной в них питательной средой и парафиновым маслом (крышки должны быть приоткрыты!). Далее следует выполнить пункты 4 - 10 по основной методике (см. выше). 3.10. Определение Bacillus cereus 1. Среда: модификация селективной среды Мозеля (готовится в соответствии с инструкцией - см. гл. 10). 2. Протокол измерения. 2.1. Установить температуру 37 -С на приборе "Bac Trac". 2.2. В основном меню программы "Bac Trac" установить следующие параметры: Параметры для инкубаторного блока (Adjust parameters): Время исследования (Duration) 24 ч Масштаб измерений (Scale): М-параметр 0 - 50% Е-параметр 0 - 50% Время задержки (Delay) 1 ч Пороговые значения (Thresholds): М-параметр 5% Е-параметр 10%. Проводить учет результатов по М-параметру. Пороговое значение по времени (Time limit) 30 ч. 3. Добавить в каждую измерительную ячейку по 9 мл модифицированной среды Мозеля. 4. Добавить исследуемый образец из соответствующего разведения продукта, в котором не допускается наличие Bacillus cereus. 5. Тщательно перемешать содержимое, вращая ячейку между ладонями (не переворачивать ячейку!). 6. Для контроля среды используйте одну измерительную ячейку с 10 мл модифицированной среды Мозеля (без инокулята). 7. Выбрать в основном меню программы ЗАПУСК ИЗМЕРЕНИЙ (Start Measurement) и начать измерения. 8. После того как каждая позиция в блоке будет отмаркирована как свободная на экране монитора, поместить измерительные ячейки вприбор "Bac Trac". Измерение начнется автоматически через 1 ч после загрузки ячеек в прибор. Рост микроорганизмов и время определения изменения импеданса (IД) будут записаны автоматически. УЧЕТ РЕЗУЛЬТАТОВ: Образец загрязнен Bacillus cereus, если изменение импеданса превышает 5%-ное пороговое значение по М-параметру в течение 30 ч. |
ИНТЕРЕСНОЕ | |||
|